ഉൽപ്പന്നങ്ങൾ

ആന്ത്രാനിലിക് ആസിഡും ഫ്ലൂറസെൻസ് കണ്ടെത്തലും ഉപയോഗിച്ചുള്ള ഡെറിവേറ്റൈസേഷനെ അടിസ്ഥാനമാക്കിയുള്ള ഗ്ലൈക്കോസൈൽട്രാൻസ്ഫെറസുകൾക്കായുള്ള പുതിയ ഉയർന്ന പ്രകടനമുള്ള ലിക്വിഡ് ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫി അസ്സെ.

2-അമിനോബെൻസോയിക് ആസിഡിന്റെ (2AA; ആന്ത്രാനിലിക് ആസിഡ്, AA) 2-അമിനോബെൻസോയിക് ആസിഡിന്റെ തനതായ ലേബലിംഗ് കെമിസ്ട്രി ഉപയോഗിച്ച് β1-4 ഗാലക്‌ടോസിൽട്രാൻസ്‌ഫെറേസ് (GalT-1), α2-6 സിയാലിട്രാൻസ്‌ഫെറേസ് (ST-6) എന്നിവയുടെ പ്രവർത്തനങ്ങൾ ഉയർന്ന പ്രകടനമുള്ള ലിക്വിഡ് ഉപയോഗിച്ച് അളക്കാൻ വിശകലനങ്ങൾ വികസിപ്പിച്ചെടുത്തു. ഫ്ലൂറസെൻസ് ഡിറ്റക്ഷനോടുകൂടിയ ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫി (HPLC) (അനുമുല KR. 2006. ഗ്ലൈക്കോപ്രോട്ടീൻ കാർബോഹൈഡ്രേറ്റുകളുടെ ഉയർന്ന പ്രകടനമുള്ള ലിക്വിഡ് ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫിക് വിശകലനത്തിനായുള്ള ഫ്ലൂറസെൻസ് ഡെറിവേറ്റൈസേഷൻ രീതികളിലെ പുരോഗതി. അനൽ ബയോകെം. 350:1-23).N-Acetylglucosamine (GlcNAc), N-acetyllactosamine എന്നിവ സ്വീകരിക്കുന്നവരായും uridine diphosphate (UDP) -galactose, cytidine monophosphate (CMP) -N-acetylneuraminic acid (NANA) എന്നിവ യഥാക്രമം GalT-1, ST-6 എന്നിവയ്ക്ക് ദാതാക്കളായും ഉപയോഗിച്ചു.എൻസൈമാറ്റിക് ഉൽപ്പന്നങ്ങൾ AA ഉപയോഗിച്ച് സിറ്റുവിൽ ലേബൽ ചെയ്യുകയും സാധാരണ-ഘട്ട അവസ്ഥകൾ ഉപയോഗിച്ച് TSKgel Amide 80 നിരയിലെ അടിവസ്ത്രങ്ങളിൽ നിന്ന് വേർതിരിക്കുകയും ചെയ്തു.Gal-β1-4GlcNAc, NANA-α2-6 Gal-β1-4GlcNAc എന്നിവയുമായി താരതമ്യപ്പെടുത്തിയാണ് എൻസൈം യൂണിറ്റുകൾ പീക്ക് ഏരിയകളിൽ നിന്ന് നിർണ്ണയിക്കുന്നത്.രേഖീയത (സമയവും എൻസൈമും ഏകാഗ്രത), കൃത്യത (ഇൻട്രാ-ഇന്റർസെയ്), വിശകലനങ്ങൾക്കുള്ള പുനരുൽപാദനക്ഷമത എന്നിവ സ്ഥാപിക്കപ്പെട്ടു.ഇൻസുലേഷൻ സമയത്തും ശുദ്ധീകരണ സമയത്തും എൻസൈമിന്റെ പ്രവർത്തനങ്ങൾ നിരീക്ഷിക്കാൻ ഈ പരിശോധനകൾ ഉപയോഗപ്രദമാണെന്ന് കണ്ടെത്തി.വിശകലനങ്ങൾ വളരെ സെൻസിറ്റീവ് ആയിരുന്നു കൂടാതെ പരമ്പരാഗത റേഡിയോ ആക്ടീവ് പഞ്ചസാര അടിസ്ഥാനമാക്കിയുള്ള അളവുകൾക്ക് തുല്യമോ അതിലും മികച്ചതോ ആയിരുന്നു.കാർബോഹൈഡ്രേറ്റ് സ്വീകർത്താക്കൾ ലേബലിംഗിനായി കുറയ്ക്കുന്ന അവസാനം അടങ്ങിയിട്ടുണ്ടെങ്കിൽ, മറ്റ് ട്രാൻസ്ഫറസുകളുടെ പ്രവർത്തനം അളക്കുന്നതിനും അസ്സേ ഫോർമാറ്റ് ഉപയോഗിക്കാം.IgG ഉപയോഗിച്ച് ഗ്ലൈക്കോപ്രോട്ടീൻ സ്വീകരിക്കുന്നവർക്കുള്ള ഒരു പരിശോധന വികസിപ്പിച്ചെടുത്തു.IgG ഗ്ലൈക്കാനുകളെ (biantennary G0, G1, G2, mono- and disialylated) വേർതിരിക്കുന്നതിനായി ഒരു ചെറിയ HPLC പ്രൊഫൈലിംഗ് രീതി വികസിപ്പിച്ചെടുത്തു, ഇത് GalT-1, ST-6 പ്രവർത്തനങ്ങൾ ദ്രുതഗതിയിൽ നിർണ്ണയിക്കാൻ സഹായിച്ചു.കൂടാതെ, ക്ലിനിക്കൽ ക്രമീകരണങ്ങളിൽ IgG ഗ്ലൈക്കാനുകളിലെ മാറ്റങ്ങൾ നിരീക്ഷിക്കുന്നതിന് ഈ പ്രൊഫൈലിംഗ് രീതി ഉപയോഗപ്രദമാകും.