ഉൽപ്പന്നങ്ങൾ

ഫ്ലൂറസെൻസ് റിസോണൻസ് എനർജി ട്രാൻസ്ഫർ (FRET) ആണ് കോളിൻ E1 ചാനൽ ഡൊമെയ്‌നിന്റെ മെംബ്രൻ ടോപ്പോളജി പഠിച്ചത്.ജനിതകമായി എൻകോഡ് ചെയ്ത ഫ്ലൂറസെന്റ് അമിനോ ആസിഡും (കൊമറിൻ) ദാതാവായി FRET ഉൾപ്പെടുത്തിയിട്ടുണ്ട്, കൂടാതെ FRET സ്വീകർത്താവായി DABMI (4-(dimethylamino) phenylazophenyl-4'-maleimide) ഉപയോഗിച്ച് ടെതർ ചെയ്ത സെലക്ടീവ് ലേബൽ ചെയ്ത സിസ്റ്റൈൻ അവശിഷ്ടവും ഉൾപ്പെടുന്നു.ഫ്ലൂറസന്റ് കൊമറിൻ അവശിഷ്ടം ഒരു ഓർത്തോഗണൽ ടിആർഎൻഎ/അമിനോഅസൈൽ-ടിആർഎൻഎ സിന്തറ്റേസ് ജോഡി വഴി പ്രോട്ടീനിൽ ഉൾപ്പെടുത്തിയിട്ടുണ്ട്, ഇത് കോളിൻ ചാനൽ ഡൊമെയ്‌നിലെ ഏത് സൈറ്റിലേക്കും തിരഞ്ഞെടുക്കപ്പെട്ട സംയോജനം അനുവദിച്ചു.ഓരോ വേരിയന്റിലും കൊമറിൻ ഇൻകോർപ്പറേഷനായി ഒരു സ്റ്റോപ്പ് (TAG) മ്യൂട്ടേഷനും DABMI അറ്റാച്ച്‌മെന്റിനായി ഒരു സിസ്റ്റൈൻ (TGT) മ്യൂട്ടേഷനും ഉണ്ടായിരുന്നു.ലയിക്കുന്നതും മെംബ്രൺ ബന്ധിതവുമായ അവസ്ഥകൾക്കായി FRET വിശകലനം ഉപയോഗിച്ച് 1-6 ഹെലിസുകൾക്കുള്ളിലെ ആറ് ഇന്റർഹെലിക്കൽ ദൂരങ്ങൾ നിർണ്ണയിച്ചു.ചാനൽ ഡൊമെയ്‌നിന്റെ മെംബ്രൺ-ബൗണ്ട് ഘടനയെക്കുറിച്ച് പുതിയ ഉൾക്കാഴ്ച നൽകുന്ന മെംബ്രൻ അസോസിയേഷനിൽ ഹെലിസുകൾ 3-6 ഇടയിലുള്ള ഇന്റർഹെലിക്കൽ ദൂരത്തിൽ FRET ഡാറ്റ വലിയ മാറ്റങ്ങൾ കാണിച്ചു.പൊതുവേ, coumarin-DABMI FRET ഇന്റർഹെലിക്കൽ കാര്യക്ഷമത മെംബ്രൺ ബൈൻഡിംഗിൽ കുറയുന്നു, ഇത് കോളിൻ ചാനലിനുള്ള കുട മാതൃകയിൽ നിർമ്മിക്കുന്നു.നിലവിലുള്ളതും മുമ്പ് പ്രസിദ്ധീകരിച്ചതുമായ FRET ഡാറ്റയെ അടിസ്ഥാനമാക്കി, ചാനൽ ഡൊമെയ്‌നിന്റെ അടച്ച നിലയ്ക്കുള്ള ഒരു താൽക്കാലിക മാതൃക വികസിപ്പിച്ചെടുത്തിട്ടുണ്ട്.എക്സ്ട്രാ സെല്ലുലാർ വശത്ത് നിന്ന് ഘടികാരദിശയിൽ 1-7 ഹെലിസുകളുടെ വൃത്താകൃതിയിലുള്ള ക്രമീകരണവും ഹെലിസുകൾ 8 ഉം 9 ഉം രൂപപ്പെടുത്തിയ സെൻട്രൽ ട്രാൻസ്മെംബ്രൺ ഹെയർപിന്നിനു ചുറ്റും 1, 6, 7, 10 ഹെലിസുകളുടെ മെംബ്രൺ ഇന്റർഫേഷ്യൽ അസോസിയേഷനും മോഡൽ നിർദ്ദേശിക്കുന്നു.