ഉൽപ്പന്നങ്ങൾ

5-ഫ്ലൂറൗറാസിൽ (5-FU), രണ്ട് എൻഡോജെനസ് മോണോഫോസ്ഫേറ്റ് ന്യൂക്ലിയോടൈഡുകൾ എന്നിവയുടെ നിരവധി മെറ്റബോളിറ്റുകളെ പ്രത്യേകമായി കണക്കാക്കാൻ, ഞങ്ങൾ ഒരു ലിക്വിഡ് ക്രോമാറ്റോഗ്രഫി-ടാൻഡം മാസ് സ്പെക്ട്രോമെട്രി (LC-MS/MS) അടിസ്ഥാനമാക്കി ഒരു യഥാർത്ഥ രീതി വികസിപ്പിച്ചെടുത്തു.ഈ വിശകലനം ഇനിപ്പറയുന്നവയുടെ നിർണ്ണയം അനുവദിച്ചു: (i) 5-FU അല്ലെങ്കിൽ 5-ഫ്ലൂറോ-2′-deoxyuridine (5-FdUrd) ൽ നിന്ന് 5-ഫ്ലൂറോ-2′-ഡിയോക്‌സിയുറിഡിൻ-5′-മോണോഫോസ്ഫേറ്റിന്റെ (5-FdUMP) ഇൻട്രാ സെല്ലുലാർ ഉത്പാദനം , (ii) ഇൻട്രാ സെല്ലുലാർ 2′-deoxyuridine-5′-monophosphate (dUMP)/thymidine-5′-monophosphate (TMP) അനുപാതത്തിൽ 5-FdUMP സാന്ദ്രതയുടെ സ്വാധീനം, കൂടാതെ (iii) 5-FdUMP യുടെ സ്രവത്തിന്റെ വ്യാപ്തിയും എബിസി ട്രാൻസ്പോർട്ടറുകൾ വഴി മനുഷ്യ സംസ്ക്കരിച്ച സെല്ലുകളിൽ നിന്ന് 5-എഫ്യു.ഞങ്ങളുടെ പരീക്ഷണാത്മക സാഹചര്യങ്ങളിൽ, സെല്ലുകൾ 5-FU അല്ലെങ്കിൽ 5-FUrd ഉപയോഗിച്ച് ഇൻകുബേറ്റ് ചെയ്തു.തുടർന്ന്, സെല്ലുലാർ പ്രോട്ടീനുകൾ മെഥനോൾ ഉപയോഗിച്ച് അടിഞ്ഞു.ഈ നടപടിക്രമം ഉയർന്ന എക്സ്ട്രാക്ഷൻ വീണ്ടെടുക്കൽ നൽകി.കൂടാതെ, കോശങ്ങളിൽ നിന്നുള്ള 5-FU, 5-FdUMP സ്രവങ്ങൾ അളക്കാൻ, ഞങ്ങൾ ഈ തന്മാത്രകളുടെ അളവ് സംസ്ക്കരണ മാധ്യമത്തിൽ നടത്തി.മീഡിയ ഒന്നുകിൽ നേരിട്ട് കുത്തിവയ്ക്കപ്പെട്ടു (5-FU) അല്ലെങ്കിൽ ഒയാസിസ് വാക്സ് എക്സ്ട്രാക്ഷൻ കാട്രിഡ്ജ് (5-FdUMP) ഉപയോഗിച്ച് ഒരു സോളിഡ് ഫേസ് എക്സ്ട്രാക്ഷനിലേക്ക് പോയി.dC18 Atlantis 3.5 μm, (100 mm × 2.1 mm id) കോളത്തിൽ അമോണിയം ഫോർമാറ്റ് ബഫർ/മെഥനോൾ/വാട്ടർ (5/5/90, v/v) ഉപയോഗിച്ച് ഐസോക്രാറ്റിക് മോഡ് ഉപയോഗിച്ച് അനലിറ്റുകളുടെ വേർതിരിക്കൽ നടത്തി.റൺ ടൈം 6.2 മിനിറ്റിൽ കവിഞ്ഞില്ല.നെഗറ്റീവ് അയോൺ മോഡിൽ ഒരു ഇലക്ട്രോസ്പ്രേ ഇന്റർഫേസിൽ അനലിറ്റുകൾ അയോണൈസ് ചെയ്തു.സംയുക്തങ്ങൾക്കനുസരിച്ച് 2.5-150 ng mL -1 പരിധിയിലുള്ള രീതി ഞങ്ങൾ സാധൂകരിച്ചു.ഏഴ് ദിവസത്തിനുള്ളിൽ ഇൻട്രാ-ഇന്റർ-അസ്സെ വേരിയബിലിറ്റി 10% ൽ താഴെയാണ്.സാമ്പിളുകൾ −20 °C-ൽ കുറഞ്ഞത് രണ്ടാഴ്ചത്തേക്കെങ്കിലും സൂക്ഷിക്കുമ്പോൾ, മൂന്ന് ഫ്രീസ്-ഥോ സൈക്കിളുകൾക്ക് ശേഷവും കോശങ്ങളിലോ കൾച്ചർ മീഡിയത്തിലോ എല്ലാ സംയുക്തങ്ങളും സുസ്ഥിരമായിരുന്നു.രണ്ട് മാധ്യമങ്ങളിലും മാട്രിക്സ് ഇഫക്റ്റ് നിരീക്ഷിക്കപ്പെട്ടിട്ടില്ല.