ഉൽപ്പന്നങ്ങൾ

കപ്പോസിയുടെ സാർകോമ-അസോസിയേറ്റഡ് ഹെർപ്പസ് വൈറസിന്റെ (KSHV) ORF45 പ്രോട്ടീൻ ഒരു ഗാമാഹെർപെസ് വൈറസ്-നിർദ്ദിഷ്ട ഉടനടി-ആദ്യകാല ടെഗ്യുമെന്റ് പ്രോട്ടീനാണ്.KSHV അണുബാധയുടെ ആദ്യഘട്ടത്തിലും അവസാന ഘട്ടത്തിലും അതിന്റെ നിർണായക പങ്ക് ഞങ്ങളുടെ മുൻ പഠനങ്ങൾ വെളിപ്പെടുത്തിയിട്ടുണ്ട്.ഈ പഠനത്തിൽ, മോണോക്ലോണൽ ആന്റിബോഡികളുടെ ഒരു പാനൽ ഉപയോഗിച്ച് ORF45-ന്റെ ഇന്ററാക്ടോം ഞങ്ങൾ സർവേ നടത്തി.മുമ്പ് തിരിച്ചറിഞ്ഞ എക്‌സ്‌ട്രാ സെല്ലുലാർ റെഗുലേറ്റഡ് കൈനസ് (ERK), p90 റൈബോസോമൽ S6 കൈനസ് (RSK) പ്രോട്ടീനുകൾക്ക് പുറമേ, ~38 kDa, ~130 kDa എന്നിവയുടെ പ്രമുഖമായവ ഉൾപ്പെടെ മറ്റ് നിരവധി കോപ്പ്യൂരിഫൈഡ് പ്രോട്ടീനുകൾ ഞങ്ങൾ കണ്ടെത്തി.38-kDa പ്രോട്ടീൻ വൈറൽ ORF33 ആണെന്നും 130-kDa പ്രോട്ടീൻ സെല്ലുലാർ USP7 (ubiquitin-specific protease 7) ആണെന്നും മാസ് സ്പെക്ട്രോമെട്രി വെളിപ്പെടുത്തി.ഞങ്ങൾ ORF33-ബൈൻഡിംഗ് ഡൊമെയ്‌നെ ORF45-ന്റെ ഉയർന്ന സംരക്ഷിത കാർബോക്‌സിൽ-ടെർമിനൽ 19 അമിനോ ആസിഡുകളിലേക്കും (aa) USP7-ബൈൻഡിംഗ് ഡൊമെയ്‌നെ ORF45-ന്റെ മധ്യമേഖലയിൽ റിപ്പോർട്ട് ചെയ്‌ത സമവായ മോട്ടിഫിലേക്കും മാപ്പ് ചെയ്‌തു.ഇമ്മ്യൂണോഫ്ലൂറസെൻസ് സ്റ്റെയിനിംഗ് ഉപയോഗിച്ച്, ORF33 അല്ലെങ്കിൽ USP7 ഉപയോഗിച്ച് ORF45 ന്റെ കൊളോക്കലൈസേഷൻ ട്രാൻസ്ഫെക്റ്റഡ് കണ്ടിറ്റ് അയോണുകളിലും KSHV- ബാധിച്ച സെല്ലുകളിലും ഞങ്ങൾ നിരീക്ഷിച്ചു.കൂടാതെ, ORF33/USP7 ന്റെ ഒരു ഭാഗം ന്യൂക്ലിയസിൽ നിന്ന് സൈറ്റോപ്ലാസത്തിലേക്ക് ORF45-ആശ്രിതമായി മാറ്റുന്നത് ഞങ്ങൾ ശ്രദ്ധിച്ചു.ORF45-ലെ ORF33- അല്ലെങ്കിൽ USP7-ബൈൻഡിംഗ് ഡൊമെയ്‌ൻ ഇല്ലാതാക്കിയാൽ, ORF33 പ്രോട്ടീൻ ശേഖരണത്തിൽ ORF45 വർദ്ധനവ് ഉണ്ടായതായി ഞങ്ങൾ കണ്ടെത്തി.കൂടാതെ, KSHV ജീനോമിലെ ORF45-ന്റെ സംരക്ഷിത കാർബോക്‌സിൽ ടെർമിനസ് ഇല്ലാതാക്കുന്നത് KSHV- ബാധിച്ച കോശങ്ങളിലെ ORF33 പ്രോട്ടീന്റെ അളവ് ഗണ്യമായി കുറയ്ക്കുകയും സന്തതി വൈരിയോണുകളുടെ ഉത്പാദനം നിർത്തലാക്കുകയും ചെയ്തു.മൊത്തത്തിൽ, ഞങ്ങളുടെ ഫലങ്ങൾ ORF45 ഇന്ററാക്ടോമിന്റെ പുതിയ ഘടകങ്ങൾ വെളിപ്പെടുത്തുക മാത്രമല്ല, ഈ പ്രോട്ടീനുകൾ തമ്മിലുള്ള ഇടപെടലുകൾ KSHV ലൈറ്റിക് റെപ്ലിക്കേഷനിൽ നിർണായകമാണെന്ന് തെളിയിക്കുകയും ചെയ്യുന്നു. കപ്പോസിയുടെ സാർകോമ-അസോസിയേറ്റഡ് ഹെർപ്പസ് വൈറസ് (KSHV) നിരവധി മനുഷ്യ ക്യാൻസറുകൾക്ക് കാരണമാകുന്ന ഏജന്റാണ്.KSHV ORF45 എന്നത് KSHV ലൈറ്റിക് റെപ്ലിക്കേഷന് ആവശ്യമായ ഒരു മൾട്ടിഫങ്ഷണൽ പ്രോട്ടീനാണ്, എന്നാൽ ORF45 അതിന്റെ നിർണായക പ്രവർത്തനങ്ങൾ നിർവഹിക്കുന്ന കൃത്യമായ സംവിധാനങ്ങൾ വ്യക്തമല്ല.കോശങ്ങളിലെ എല്ലാ ORF45 pr otein ഉയർന്ന തന്മാത്രാ ഭാരമുള്ള സമുച്ചയങ്ങളിൽ നിലവിലുണ്ടെന്ന് ഞങ്ങളുടെ മുൻ പഠനങ്ങൾ വെളിപ്പെടുത്തി.അതിനാൽ ലൈറ്റിക് റെപ്ലിക്കേഷൻ സമയത്ത് അതിന്റെ റോളുകളെക്കുറിച്ചുള്ള ഉൾക്കാഴ്‌ചകൾ നൽകുന്നതിന് ORF45-ന്റെ ഇന്ററാക്‌ടോമിനെ വിശേഷിപ്പിക്കാൻ ഞങ്ങൾ ശ്രമിച്ചു.മോണോക്ലോണൽ ആന്റിബോഡികളുടെ ഒരു പാനൽ ഉപയോഗിച്ച്, KSHV- ബാധിച്ച കോശങ്ങളിലെ ORF45 ഇന്ററാക്ടോം ഞങ്ങൾ സർവേ നടത്തി.ORF45-ന്റെ രണ്ട് പുതിയ ബൈൻഡിംഗ് പങ്കാളികളെ ഞങ്ങൾ തിരിച്ചറിഞ്ഞു: വൈറൽ പ്രോട്ടീൻ ORF33, സെല്ലുലാർ ubiquitin-specific protease 7 (USP7).KSHV വൈറൽ കണങ്ങളുടെ കാര്യക്ഷമമായ ഉൽപാദനത്തിന് ORF45 ഉം ORF33 ഉം തമ്മിലുള്ള പ്രതിപ്രവർത്തനം നിർണായകമാണെന്ന് ഞങ്ങൾ കൂടുതൽ തെളിയിക്കുന്നു, ഈ ഇടപെടലിലെ ടാർഗെറ്റുചെയ്‌ത ഇടപെടൽ KSHV ലൈറ്റിക് റെപ്ലിക്കേഷനെ തടയുന്നതിനുള്ള ഒരു പുതിയ തന്ത്രത്തെ പ്രതിനിധീകരിക്കുമെന്ന് നിർദ്ദേശിക്കുന്നു.