ഉൽപ്പന്നങ്ങൾ

X-gal (5-bromo-4-chloro-3-indolyl-β-D-galactopyranoside എന്നതിന്റെ ചുരുക്കപ്പേരിൽ BCIG) ഒരു ബദൽ ഇൻഡോളുമായി ബന്ധിപ്പിച്ചിരിക്കുന്ന ഗാലക്ടോസ് അടങ്ങിയ ഒരു ജൈവ സംയുക്തമാണ്.1964-ൽ ജെറോം ഹോർവിറ്റ്‌സും സഹകാരികളും ചേർന്നാണ് ഈ സംയുക്തം സമന്വയിപ്പിച്ചത്. ഔപചാരിക രാസനാമം പലപ്പോഴും കൃത്യത കുറഞ്ഞതും എന്നാൽ ബ്രോമോക്ലോറോഇൻഡോക്‌സിൽ ഗാലക്‌ടോസൈഡ് പോലുള്ള ബുദ്ധിമുട്ടുള്ളതുമായ പദസമുച്ചയങ്ങളായി ചുരുക്കുന്നു.ഇൻഡോക്‌സിലിൽ നിന്നുള്ള എക്‌സ് എക്‌സ്-ഗാൽ സങ്കോചത്തിലെ എക്‌സിന്റെ ഉറവിടമായിരിക്കാം.സാധാരണ ലക്ഷ്യമായ β-ഗാലക്‌ടോസൈഡിന്റെ സ്ഥാനത്ത് β-ഗാലക്‌ടോസിഡേസ് എന്ന എൻസൈമിന്റെ സാന്നിധ്യം പരിശോധിക്കാൻ മോളിക്യുലാർ ബയോളജിയിൽ എക്‌സ്-ഗാൽ ഉപയോഗിക്കാറുണ്ട്.ഹിസ്റ്റോകെമിസ്ട്രിയിലും ബാക്ടീരിയോളജിയിലും ഈ എൻസൈമിന്റെ പ്രവർത്തനം കണ്ടെത്താനും ഇത് ഉപയോഗിക്കുന്നു.എൻസൈം-കാറ്റലൈസ്ഡ് ജലവിശ്ലേഷണത്തിന്റെ ഫലമായി ഇൻഡിഗോ ഡൈ പോലെയുള്ള ലയിക്കാത്ത നീല സംയുക്തങ്ങൾ നൽകുന്ന നിരവധി ഇൻഡോക്‌സിൽ ഗ്ലൈക്കോസൈഡുകളിലും എസ്റ്ററുകളിലും ഒന്നാണ് എക്സ്-ഗാൽ.

എക്സ്-ഗാൽ ലാക്ടോസിന്റെ ഒരു അനലോഗ് ആണ്, അതിനാൽ ഡി-ലാക്ടോസിലെ β-ഗ്ലൈക്കോസിഡിക് ബോണ്ടിനെ പിളർത്തുന്ന β-ഗാലക്റ്റോസിഡേസ് എൻസൈം ഹൈഡ്രോലൈസ് ചെയ്തേക്കാം.X-gal, β-galactosidase വിഭജിക്കുമ്പോൾ, ഗാലക്ടോസും 5-bromo- 4-chloro-3-hydroxyindole - 1. രണ്ടാമത്തേത് സ്വയമേവ ഡൈമറൈസ് ചെയ്യുകയും 5,5'-dibromo-4,4'-dichloro ആയി ഓക്സിഡൈസ് ചെയ്യുകയും ചെയ്യുന്നു. -ഇൻഡിഗോ - 2, ലയിക്കാത്ത തീവ്രമായ നീല ഉൽപ്പന്നം.X-gal തന്നെ നിറമില്ലാത്തതാണ്, അതിനാൽ നീല നിറമുള്ള ഉൽപ്പന്നത്തിന്റെ സാന്നിധ്യം സജീവമായ β-galactosidase ന്റെ സാന്നിധ്യത്തിനുള്ള ഒരു പരിശോധനയായി ഉപയോഗിക്കാം.ഇത് ബാക്ടീരിയൽ β- ഗാലക്‌ടോസിഡേസിനെ (lacZ എന്ന് വിളിക്കുന്നു) വിവിധ ആപ്ലിക്കേഷനുകളിൽ റിപ്പോർട്ടറായി ഉപയോഗിക്കാനും അനുവദിക്കുന്നു.

രണ്ട്-ഹൈബ്രിഡ് വിശകലനത്തിൽ, പരസ്പരം ഇടപഴകുന്ന പ്രോട്ടീനുകളെ തിരിച്ചറിയാൻ β-galactosidase ഒരു റിപ്പോർട്ടറായി ഉപയോഗിക്കാം.ഈ രീതിയിൽ, യീസ്റ്റ് അല്ലെങ്കിൽ ബാക്ടീരിയൽ സിസ്റ്റം ഉപയോഗിച്ച് പ്രോട്ടീൻ ഇടപെടലിനായി ജീനോം ലൈബ്രറികൾ പരിശോധിക്കാം.പ്രോട്ടീനുകൾക്കിടയിൽ ഒരു വിജയകരമായ ഇടപെടൽ നടക്കുന്നിടത്ത്, അത് ഒരു പ്രമോട്ടറുമായി ഒരു ആക്ടിവേഷൻ ഡൊമെയ്‌ൻ ബന്ധിപ്പിക്കുന്നതിലേക്ക് നയിക്കും.പ്രൊമോട്ടർ ഒരു lacZ ജീനുമായി ബന്ധിപ്പിച്ചിട്ടുണ്ടെങ്കിൽ, X-gal ന്റെ സാന്നിധ്യത്തിൽ നീല-വർണ്ണ കോളനികളുടെ രൂപീകരണത്തിന് കാരണമാകുന്ന β-galactosidase ന്റെ ഉത്പാദനം പ്രോട്ടീനുകൾ തമ്മിലുള്ള വിജയകരമായ പ്രതിപ്രവർത്തനത്തെ സൂചിപ്പിക്കും.ഏകദേശം 106-ൽ താഴെ വലിപ്പമുള്ള ലൈബ്രറികൾ സ്‌ക്രീനിംഗ് ചെയ്യാൻ ഈ സാങ്കേതികവിദ്യ പരിമിതപ്പെടുത്തിയേക്കാം. എക്‌സ്-ഗാലിന്റെ വിജയകരമായ പിളർപ്പും ഇൻഡോളിന്റെ ബാഷ്‌പീകരണത്തിന്റെ ഫലമായി ഒരു ദുർഗന്ധം സൃഷ്‌ടിക്കുന്നു.

X-gal തന്നെ നിറമില്ലാത്തതിനാൽ, സജീവമായ β-galactosidase ന്റെ സാന്നിധ്യത്തിനായി നീല നിറമുള്ള ഉൽപ്പന്നത്തിന്റെ സാന്നിധ്യം ഒരു പരിശോധനയായി ഉപയോഗിക്കാം.

സജീവമായ ഒരു എൻസൈമിന്റെ ഈ എളുപ്പത്തിലുള്ള തിരിച്ചറിയൽ βgalactosidase (lacZ ജീൻ) എന്ന ജീനിനെ വിവിധ ആപ്ലിക്കേഷനുകളിൽ ഒരു റിപ്പോർട്ടർ ജീനായി ഉപയോഗിക്കാൻ അനുവദിക്കുന്നു.