ഉൽപ്പന്നങ്ങൾ

പ്രോട്ടീൻ ഫോസ്ഫോറിലേഷൻ ശൃംഖലകളുടെ സങ്കീർണ്ണത കാരണം പ്രോട്ടീം-വൈഡ് ഫോസ്ഫോറിലേഷൻ സംഭവങ്ങളുടെ വിശകലനം ഇപ്പോഴും ഒരു പ്രധാന വിശകലന വെല്ലുവിളിയാണ്.ഈ കൃതിയിൽ, ഫോസ്ഫോപ്രോട്ടീമിന്റെ ആഗോള വിശകലനത്തിന് സംഭാവന ചെയ്യാനുള്ള അവരുടെ കഴിവുമായി ബന്ധപ്പെട്ട് Lys-N, Lys-C, ട്രിപ്സിൻ എന്നിവയുടെ പരസ്പര പൂരകത ഞങ്ങൾ വിലയിരുത്തുന്നു.N-terminally acetylated, phosphorylated, nonmodified പെപ്റ്റൈഡുകൾ എന്നിവ കാര്യക്ഷമമായി വേർതിരിക്കുന്നതിന്, കുറഞ്ഞ pH ശക്തമായ കാറ്റേഷൻ എക്സ്ചേഞ്ചിന്റെ ഒരു പരിഷ്കൃത പതിപ്പ് ഉപയോഗിച്ചു.മൂന്ന് എൻസൈമുകളുടെ സംയോജനം ഉപയോഗിച്ച് 1 മില്ലിഗ്രാം പ്രോട്ടീനിൽ നിന്ന് <1% തെറ്റായ കണ്ടെത്തൽ നിരക്ക് ഉപയോഗിച്ച് മൊത്തം 5036 അനാവശ്യ ഫോസ്‌ഫോപെപ്റ്റൈഡുകൾ തിരിച്ചറിയാൻ കഴിഞ്ഞു.വ്യത്യസ്‌ത പ്രോട്ടീസുകൾ ഉപയോഗിച്ച് സൃഷ്‌ടിച്ച ഫോസ്‌ഫോപെപ്‌റ്റൈഡ് ഡാറ്റാ സെറ്റുകൾ തമ്മിലുള്ള ഓവർലാപ്പ് നാമമാത്രമാണെന്ന് ഞങ്ങളുടെ ഡാറ്റ വെളിപ്പെടുത്തി, അതേസമയം സമാനമായി സൃഷ്‌ടിച്ച രണ്ട് ട്രിപ്‌റ്റിക് ഡാറ്റാ സെറ്റുകൾ തമ്മിലുള്ള ഓവർലാപ്പ് കുറഞ്ഞത് 4 മടങ്ങ് കൂടുതലാണെന്ന് കണ്ടെത്തി.ഈ രീതിയിൽ, Lys-N, ട്രിപ്സിൻ എന്നിവയുടെ സമാന്തര ഉപയോഗം, ട്രിപ്സിനുമായി താരതമ്യപ്പെടുത്തുമ്പോൾ കണ്ടെത്തിയ ഫോസ്ഫോപെപ്റ്റൈഡുകളുടെ എണ്ണത്തിൽ 72% വർദ്ധനവ് സാധ്യമാക്കി, അതേസമയം ട്രൈപ്സിൻ പകർപ്പെടുക്കൽ പരീക്ഷണം 25% വർദ്ധനവിന് കാരണമായി.അതിനാൽ, ട്രൈപ്സിൻ, ലൈസ്-എൻ ഡാറ്റ എന്നിവയിൽ മാത്രം ശ്രദ്ധ കേന്ദ്രീകരിക്കുമ്പോൾ, 4671 അനാവശ്യ ഫോസ്ഫോപെപ്റ്റൈഡുകൾ ഞങ്ങൾ തിരിച്ചറിഞ്ഞു.കണ്ടെത്തിയ സൈറ്റുകളുടെ കൂടുതൽ വിശകലനം, ലൈസ്-എൻ, ട്രൈപ്സിൻ ഡാറ്റാ സെറ്റുകൾ വ്യത്യസ്തമായ ഫോസ്ഫോറിലേഷൻ മോട്ടിഫുകളാൽ സമ്പുഷ്ടമാണെന്ന് കാണിച്ചു, ഫോസ്ഫോപ്രോട്ടീം വിശകലനങ്ങളിൽ മൾട്ടിപ്രോട്ടീസ് സമീപനങ്ങൾ വളരെ വിലപ്പെട്ടതാണെന്ന് കൂടുതൽ തെളിയിക്കുന്നു.